湖南長軻科技發(fā)展有限公司
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PCR實(shí)驗(yàn)室目前已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域,例如艾滋病、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷、DNA指紋、個體識別、親子鑒定、法醫(yī)物證、動植物檢疫、動物及其衍生產(chǎn)品檢測、動物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測、轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等。
工藝要求
PCR實(shí)驗(yàn)室主要由四個工作區(qū)域組成的,也就是試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)。
工作內(nèi)容如下:
(1)試劑準(zhǔn)備區(qū)-安全為首要
試劑準(zhǔn)備區(qū)的主要工作是完成試劑和主反應(yīng)混合液的儲存、配制和封裝等。所有運(yùn)送到試劑準(zhǔn)備區(qū)的試劑和材料不應(yīng)經(jīng)過其他區(qū)域,試劑和原材料應(yīng)在本區(qū)內(nèi)儲存和制備,試劑準(zhǔn)備區(qū)的氣壓相對外界應(yīng)保持正壓。
(2)標(biāo)本制備區(qū)
標(biāo)本制備區(qū)的工作主要是樣本的保存、核酸提取和貯存、樣本加入擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成等;樣本應(yīng)直接運(yùn)送并儲存在本區(qū)域內(nèi),不應(yīng)經(jīng)過其他區(qū)域 。
對于氣流壓力的控制,由于在標(biāo)本制備區(qū)內(nèi)加樣操作可能會產(chǎn)生氣溶膠,為避免氣溶膠的擴(kuò)散和污染,標(biāo)本制備區(qū)對外界應(yīng)保持負(fù)壓。從質(zhì)量控制的角度出發(fā),標(biāo)本制備區(qū)相對于擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)以及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)為正壓,以避免從鄰近區(qū)域進(jìn)入本區(qū)域的氣溶膠污染。但當(dāng)涉病原微生物時,標(biāo)本制備區(qū)GB 19489-2008《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用安全》對BSL-2實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)安全要求,此時本區(qū)相對于擴(kuò)增區(qū)應(yīng)為負(fù)壓,故涉及病原微生物操作時,在綜合考慮質(zhì)量控制、生物安全因素的前提下,整體上標(biāo)本制備區(qū)與擴(kuò)增區(qū)的壓力應(yīng)持平,即均為負(fù)壓,兩個相鄰區(qū)域之間的負(fù)壓值基本上是相當(dāng)?shù)摹?/span>
(3)擴(kuò)增區(qū)
擴(kuò)增區(qū)的主要工作是DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測定。此外反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液和已制備的DNA模板的加入等也均可在本區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。對于氣流壓力的控制,相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)域漏出造成污染。
(4)產(chǎn)物分析區(qū)
產(chǎn)物分析區(qū)的主要工作是擴(kuò)增產(chǎn)物的分析。對于氣流壓力的控制,該區(qū)域是PCR實(shí)驗(yàn)的最后一步,壓力應(yīng)為最低,相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出造成污染。

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