在這里，我們討論了控制或最小化分子實(shí)驗(yàn)室污染的十種方法。

1.實(shí)驗(yàn)室建設(shè)

預(yù)防污染始于PCR實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)或建立。至少應(yīng)指定兩個區(qū)域進(jìn)行PCR檢測：PCR前和PCR后。應(yīng)指定一個房間或區(qū)域?qū)ｉT用于預(yù)PCR。最理想的是，這個房間應(yīng)該進(jìn)一步分為兩個區(qū)域，PCR主混合物制備和樣品制備/主混合物的添加。

通過使用具有UV光的死氣箱(DAB)，可以將主混合物制備與樣品添加分開。DAB擁有主混合物制備所需的消耗品和專用小型設(shè)備(小型離心機(jī)，渦流管，移液器，吸頭和管)。

樣品制備可涉及手動或自動提取。樣品制備所需的消耗品和小型設(shè)備(小型離心機(jī)，渦流管，移液器，吸頭和管等)可以放在臺式，另一個DAB或生物安全柜(BSC)中，具體取決于您正在使用的樣品。該區(qū)域還可用于將樣品添加到PCR主混合物中。

應(yīng)該有一個專用的冰箱/冰柜用于存放工具包，另一個用于存放樣品。

應(yīng)建立第二個房間(PCR后)用于擴(kuò)增后步驟和分析。這個房間應(yīng)該與PCR前房間分開。PCR后室是用于擴(kuò)增的熱循環(huán)儀和PCR后分析所需的任何儀器的位置。理想情況下，DAB將用于該區(qū)域，用于在PCR擴(kuò)增后需要操作開放管的任何步驟。DAB應(yīng)容納PCR后制備所需的消耗品和小型設(shè)備(小型離心機(jī)，渦流泵，移液器，吸頭和管)。

2.環(huán)境控制

這兩個區(qū)域(預(yù)PCR和后PCR)應(yīng)該具有獨(dú)立的環(huán)境控制，而不是使用常見的管道系統(tǒng)進(jìn)行空調(diào)。此外，兩個房間都應(yīng)配備氣鎖門。注意：如果無法為PCR前和PCR后工作建立物理屏障或單獨(dú)的房間，應(yīng)盡一切努力將工作區(qū)域盡可能遠(yuǎn)地設(shè)置。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員應(yīng)將這兩個工作區(qū)視為處于不同的房間。應(yīng)注意在每個區(qū)域佩戴不同的個人防護(hù)裝備(PPE)。

3.單向工作流程

分子實(shí)驗(yàn)室的工作流程應(yīng)僅在一個方向上繼續(xù)，即Pre-PCR> PCR后。PCR主混合試劑和可能含有PCR模板的樣品應(yīng)僅在PCR前室制備。

在PCR后室中經(jīng)歷擴(kuò)增的管含有擴(kuò)增子(擴(kuò)增的模板)，并且在任何情況下都不應(yīng)該在PCR前室中打開或引入。擴(kuò)增子可以作為未來PCR反應(yīng)的模板，因此很容易污染PCR或樣品制備試劑，消耗品或設(shè)備。

這意味著，在未經(jīng)徹底凈化的情況下，引入PCR后室的消耗品和PPE(實(shí)驗(yàn)室外套，手套，護(hù)目鏡等)不應(yīng)放回PCR前室。

當(dāng)從一個房間移動到另一個房間時，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須記住改變PPE。理想情況下，在PCR后工作的技術(shù)人員不應(yīng)該回到Pre-PCR中工作。如果必須違背單向工作流程，則應(yīng)注意更改PPE。

4.專用耗材和設(shè)備

我們可以最大限度地減少PCR實(shí)驗(yàn)室污染的另一種方法是使用專用于每個房間的消耗品和設(shè)備。每個房間和/或工作區(qū)域應(yīng)該有自己的離心機(jī)，渦旋器，移液器，手套，外套等。例如，永遠(yuǎn)不要“借用”PCR后移液器用于預(yù)PCR室，而不首先徹底凈化移液器。

5.使用耐氣溶膠移液器

移液樣品時，即使是經(jīng)驗(yàn)最豐富的技術(shù)人員也可以在沒有適當(dāng)?shù)囊埔杭夹g(shù)和移液器吸頭的情況下制造氣溶膠。氣溶膠可導(dǎo)致樣品間的交叉污染。防氣溶膠移液管尖端具有屏障，當(dāng)暴露于潛在的液體污染物時，該屏障用作密封，將它們捕獲在屏障內(nèi)。這可以保護(hù)移液器免受任何液體污染。

6.移液技術(shù)

在任何分子檢測中，適當(dāng)?shù)囊埔杭夹g(shù)對結(jié)果的性能和質(zhì)量至關(guān)重要。此外，正確的移液技術(shù)可以最大限度地減少樣品之間的污染，從而導(dǎo)致假陽性結(jié)果。適當(dāng)?shù)囊埔杭夹g(shù)可確保吸取和分配準(zhǔn)確的體積，并在分配液體時避免飛濺。小心打開和關(guān)閉所有樣品管和反應(yīng)板，使樣品不會濺出。打開管之前旋轉(zhuǎn)管/板可以在打開管時防止氣溶膠。還要記住，盡可能始終保持反應(yīng)和組件的上限。防止交叉污染的最有效方法之一是使用良好的移液技術(shù)。

7.經(jīng)常換手套

在PCR區(qū)域工作時，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員應(yīng)始終戴上新手套。經(jīng)常更換手套，特別是如果您懷疑他們已經(jīng)被含有模板DNA的溶液弄臟了。

8.無菌清潔技術(shù)

在PCR工作之前和之后應(yīng)定期進(jìn)行適當(dāng)?shù)臒o菌清潔。這適用于所有工作表面，包括臺面，移液器，冰箱/冷凍手柄和任何其他接觸點(diǎn)。我們建議每天使用10-15%(0.5-1%次氯酸鈉)漂白劑擦拭并浸泡這些表面。2十五分鐘后，使用DI水沾濕的紙巾清除漂白劑殘留物。然后用70%酒精濕潤的紙巾幫助快速干燥表面。此外，在使用至少10分鐘后，在新鮮的10%漂白劑中浸泡使用架子，然后在一夜之間進(jìn)行漂洗和風(fēng)干可以防止進(jìn)一步污染。

9. 擦拭測試

定期擦拭試驗(yàn)應(yīng)作為標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)嵤?，以便在污染成為問題之前主動監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中的污染情況。至少應(yīng)該每月進(jìn)行一次擦拭測試。如果懷疑有任何污染，應(yīng)增加此頻率。

10.積極率監(jiān)測

標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐包括陽性對照以確保提取和擴(kuò)增的適當(dāng)性能以及試劑的功能。無模板對照(NTC)用于檢查試劑，消耗品和環(huán)境中是否存在污染。除陽性和陰性對照外，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立監(jiān)測陽性率的標(biāo)準(zhǔn)程序。應(yīng)調(diào)查無法確定病因(即季節(jié)性爆發(fā))的陽性標(biāo)本突然增加。

以上，是衡陽實(shí)驗(yàn)室建設(shè)公司的小編為大家總結(jié)的十種方法，并提供了防止未來污染的技巧。通過努力遵循這些建議，您可以防止污染在您的實(shí)驗(yàn)室中成為問題。